醫(yī)藥工業(yè)
潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方式
1目地
建立潔凈度（沉降菌）的磨煉限度安全操作規(guī)程，為沉降菌查驗(yàn)員工給予精確的限度實(shí)際操作方法。
2局限性
適用本企業(yè)潔凈度（沉降菌）查驗(yàn)的全過(guò)程。
3義務(wù)
QA對(duì)本規(guī)程的有效實(shí)行擔(dān)負(fù)監(jiān)控查驗(yàn)義務(wù)，QC對(duì)本規(guī)程的推行用心。
4程序流程
4.1簡(jiǎn)述：本限度對(duì)
無(wú)塵車(chē)間細(xì)顆粒物及微生物菌種環(huán)境污染劃分需舉辦自然環(huán)境操縱的屋子或地區(qū)。其建造構(gòu)造、武器裝備以及應(yīng)用均具備減少對(duì)該地域內(nèi)污染物的干預(yù)、產(chǎn)生和停留的作用。
4.2測(cè)試方法
4.2.1方法摘要：
本限度按我國(guó)技藝監(jiān)控局公布的《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方式》，接受地基沉降法，即利用當(dāng)然地基沉降基本原理互聯(lián)網(wǎng)在空氣中的微生物物體于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)多個(gè)時(shí)間，在適宜的前提下讓其滋長(zhǎng)到可以看到的菌體舉辦記數(shù)，以平板電腦培養(yǎng)皿中的菌體數(shù)來(lái)分辨清潔自然環(huán)境內(nèi)的活微生物菌種數(shù)，并借此來(lái)鑒定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
4.2.2儀器設(shè)備
儀器設(shè)備包含：培養(yǎng)皿、培育基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。
4.2.2.1培養(yǎng)皿
一樣通常接受f90mm×15mm規(guī)格型號(hào)的培養(yǎng)皿。
4.2.2.2培養(yǎng)基
黃豆酪胚盤(pán)瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培育基（SDA）或客戶認(rèn)同并簡(jiǎn)歷證了的培養(yǎng)基。
4.3測(cè)試前的標(biāo)準(zhǔn)：
4.3.1測(cè)試情況；
4.3.1.1沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（區(qū)）的溫濕度記錄須抵達(dá)劃分的規(guī)定，負(fù)壓差、換風(fēng)次數(shù)、空氣流速務(wù)必操縱在劃分值內(nèi)。潔凈室（區(qū)）的溫度和空氣濕度應(yīng)與其說(shuō)生產(chǎn)制造及加工工藝規(guī)定相切合（無(wú)特別要求時(shí)，溫度在18℃～26℃，空氣濕度在45%～65%中間為宜），與此同時(shí)應(yīng)滿足測(cè)試儀器設(shè)備的應(yīng)用局限性。
4.3.1.2沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（區(qū)）早已由消毒殺菌。
4.3.1.3測(cè)試情況有靜止和信息二種，測(cè)試情況的選用務(wù)必相符合生產(chǎn)制造的規(guī)定，并在敘述中標(biāo)明測(cè)試情況。
4.3.1.4靜態(tài)數(shù)據(jù)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿外露時(shí)間為30min以上；動(dòng)態(tài)性測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿外露時(shí)間為不得超過(guò)4h。
4.3.2測(cè)試員工：
4.3.2.1測(cè)試員工務(wù)必衣著相符合自然環(huán)境潔凈度級(jí)其他事兒服。
4.3.2.2靜態(tài)數(shù)據(jù)測(cè)試時(shí)，房間內(nèi)測(cè)試員工不可超過(guò)2人。
4.3.3測(cè)試時(shí)間：
4.3.3.1對(duì)單邊流，如100級(jí)凈化屋子及層.流事兒臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)機(jī)組正
常運(yùn)作不少于10min后最開(kāi)始。
4.3.3.2對(duì)非單方面流，如B級(jí)、B級(jí)以上的凈化屋子，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)機(jī)組正常的運(yùn)作不少于30min后最開(kāi)始。
4.3.4重視事宜：
4.3.4.1測(cè)試用品要作殺菌處理，以保證測(cè)試的穩(wěn)定性、精確性。
4.3.4.2接受一切對(duì)策避免人為因素對(duì)樣版的環(huán)境污染。
4.3.4.3對(duì)培養(yǎng)基、培育標(biāo)準(zhǔn)以及他主要參數(shù)作詳盡的記錄。
4.3.4.4因?yàn)椴【贩N繁多，差別甚大，記數(shù)時(shí)一樣平時(shí)用電子散射光于培養(yǎng)皿后面或正臉細(xì)心調(diào)查，不必漏計(jì)培養(yǎng)皿邊沿生長(zhǎng)發(fā)育的菌體，并須重視細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀的差別，必須時(shí)要高倍顯微鏡辨別。
4.3.4.5取樣前要認(rèn)真仔細(xì)每一個(gè)培養(yǎng)皿的品質(zhì)，如發(fā)覺(jué)質(zhì)變、損壞或環(huán)境污染的應(yīng)去除。
4.3.4.6針對(duì)單邊流潔凈室（區(qū)）或正壓送風(fēng)口，采樣器取樣口房屋朝向應(yīng)正對(duì)著氣旋偏重；針對(duì)非單方面流潔凈室（區(qū)），取樣口往上。
4.3.4.7布署取樣點(diǎn)時(shí)，最少應(yīng)只要繞開(kāi)細(xì)顆粒物較密集的回風(fēng)管道；取樣時(shí)，測(cè)試員工應(yīng)立在取樣口的低處側(cè)，并只要少行走。
4.3.4.8培養(yǎng)皿在用以檢驗(yàn)時(shí)，為阻攔培養(yǎng)皿運(yùn)送或挪動(dòng)過(guò)程導(dǎo)致的危害，宜與此同時(shí)舉辦對(duì)比實(shí)驗(yàn)，每一次或各個(gè)地區(qū)取1個(gè)對(duì)比皿，與取樣皿同法實(shí)際操作但不需外露取樣，隨后與采集后的培養(yǎng)皿（TSA或SDA）一起放進(jìn)培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，實(shí)際效果應(yīng)無(wú)菌檢測(cè)落生長(zhǎng)發(fā)育。
4.4測(cè)試流程：
4.4.1取樣方法：
4.4.1.1儀器設(shè)備和用品：培養(yǎng)皿。
4.4.1.2方法：
a取樣點(diǎn)一樣平時(shí)在離路面0.8m相對(duì)高度的水準(zhǔn)表面均值布署。
b取樣點(diǎn)超過(guò)5點(diǎn)時(shí)，還可以在離路面0.8m～1.5m相對(duì)高度的范圍內(nèi)分層次布署，但各層不少于5點(diǎn)。
c開(kāi)啟培養(yǎng)皿蓋，使培育基外邊外露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋子之后顛倒。
至少取樣點(diǎn)數(shù)量
總面積
（m2）
潔凈度等級(jí)
總面積
（m2）
潔凈度等級(jí)
注：表格中的總面積，針對(duì)單邊流潔凈室，就是指正壓送風(fēng)口總面積。針對(duì)非單方面流潔凈室就是指臥室的總面積。
至少培養(yǎng)皿數(shù)
潔凈度等級(jí)
所需φ90mm培養(yǎng)皿數(shù)（地基沉降0.5h計(jì)）
4.4.2培養(yǎng)：
4.4.2.1儀器設(shè)備和用品：培養(yǎng)箱、天平秤（萬(wàn)分之一）、稱重紙、錐形瓶（1000ml、150ml）、容量瓶（1000ml）、高壓蒸汽滅菌鍋。
4.4.2.2培養(yǎng)基：
4.4.2.2.1黃豆酪胚盤(pán)瓊脂培養(yǎng)基（TSA）：
a）要素：酪胚盤(pán)胰酶消化吸收物15g大豆粉番木瓜胚盤(pán)酶消化吸收物5g氧化鈉5g瓊脂15g純水系統(tǒng)1000ml
b）制作方法：取以上要素除瓊脂，參雜，發(fā)燙消溶，調(diào)理pH值使殺菌后為7.3±0.2，添加瓊脂，加溫融化后，散裝，殺菌，制冷至約60℃，在無(wú)菌技術(shù)規(guī)定下竭盡約20ml至無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)皿（f90mm）中。加蓋后在室內(nèi)溫度放入凝結(jié)。
4.4.2.2.2沙氏培養(yǎng)基（SDA）：
a）葡萄糖水40g酪胚盤(pán)胰酶消化吸收物、動(dòng)物組織的胃酶消化物相等參雜10g瓊脂15g純水系統(tǒng)1000ml
b）制作方法：取以上要素除瓊脂，參雜，發(fā)燙消溶，調(diào)理pH值使殺菌后為5.6±0.2，添加瓊脂，加溫融化后，散裝，殺菌，制冷至約60℃，在無(wú)菌技術(shù)規(guī)定下竭盡約20ml至無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)皿（f90mm）中。加蓋后在室內(nèi)溫度放入凝結(jié)。
4.4.2.3方法：全部取樣竣事后，將培養(yǎng)皿倒放置恒溫培養(yǎng)箱中培育，接受黃豆酪胚盤(pán)瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配置的培養(yǎng)皿在30～35℃培育箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2天；接受沙氏培養(yǎng)基（SDA）配置的培養(yǎng)皿在20～25℃培育箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于5天。每次培養(yǎng)基應(yīng)該有對(duì)比實(shí)驗(yàn)，磨煉培養(yǎng)基自身是不是環(huán)境污染。可每次選中3只培養(yǎng)皿作對(duì)比培養(yǎng)。
4.4.3菌落計(jì)數(shù)：
4.4.3.1用人眼立即記數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，隨后用5～10倍高倍放大鏡查驗(yàn)，有無(wú)忽略。
4.4.3.2若培養(yǎng)皿上面有2個(gè)或2個(gè)以上的菌體重合，可辨別時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
4.4.4實(shí)際效果籌算：
4.4.4.1用記數(shù)方法得到每個(gè)培養(yǎng)皿的菌體數(shù)。
4.4.4.2均值菌體數(shù)的籌算，見(jiàn)式。
M1M2…Mn
均值菌體數(shù)M=
n
式中M―均值菌體數(shù)；
M1―1號(hào)培養(yǎng)皿菌體數(shù)；
M2―2號(hào)培養(yǎng)皿菌體數(shù)；
Mn―n號(hào)培養(yǎng)皿菌體數(shù)；
n―培養(yǎng)皿數(shù)量。
4.4.5實(shí)際效果鑒定：
4.4.5.1潔凈室（區(qū)）內(nèi)的均值菌體數(shù)務(wù)必小于所選中的鑒定限度。
4.4.5.2在靜態(tài)數(shù)據(jù)測(cè)試時(shí)，若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的沉降菌均值菌體數(shù)超越鑒定限度，則務(wù)必對(duì)于此事地區(qū)先舉辦消毒殺菌，隨后再次取樣2次，測(cè)試實(shí)際效果均須及格。
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